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通用型維生素E高效液相色譜法定量檢測試劑盒產品說明書(中文版)
點擊次數(shù):3471 更新時間:2021-01-26

 

通用型維生素E高效液相色譜法定量檢測試劑盒產品說明書(中文版)

 

主要用途

 

GENMED通用型維生素E高效液相色譜法定量檢測試劑是一種旨在通過有機溶劑萃取,必要時皂化處理,進而在高效液相色譜儀和紫外光譜下(294nm波長)檢測分析,分離出可溶性維生素E波峰,以定量測定樣品中α-生育酚的含量權W而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種油類、植物、蔬菜、食品、血液等樣品中維生素E檢測(包括αβ、γ、δ形式)。產品嚴格無菌,即到即用,操作簡捷,性能穩(wěn)定。

 

技術背景

 

維生素Evitamin E),又稱為生育酚(tocophenolTCP),是一種由各種甲基化的酚類構成的有機化合物,為脂溶性抗氧化劑。維生素E分成8種形式:4種生育酚,4種生育三烯酚(Tocotrienols),分別有αβ、γδ。其中α-生育酚是維生E中*&具活性,也是jia代表,在食物添加劑的命名上標記為E307。成年人的建議日攝入用量是15毫克。維生素E在植物、藻類等合成,而不能在動物中產生。維生素E在麥類、素油、水果、果仁、魚、蔬菜等中含量豐富,包括棕櫚油、橄欖油、豆油、奶油花生等。維生素E具有預防自發(fā)流產、增強免疫功能、防止未飽和脂肪酸、低密度脂蛋白和細胞膜的氧化、清除自由基、預防冠心病等作用。維生素E缺乏將導致神經性疾患,例如脊髓小腦性共濟失調(spinocerebellar ataxia)、肌病(myopathies)、貧血等。通過有機溶劑萃取,必要時進行皂化處理,排除脂類、蛋白和碳水化合物的干擾,進而在高效液相色譜儀和紫外光譜下(294nm波長)檢測分析,分離出可溶性維生素E波峰,以定量α-生育酚的含量。

 

產品內容

 

GENMED處理液(Reagent A       20毫升

GENMED皂化液(Reagent B  20毫升

GENMED酸性液(Reagent C       20毫升

GENMED萃取液(Reagent D   100毫升

GENMED溶解液(Reagent E       20毫升

GENMED流相液(Reagent F      500毫升

GENMED標準液(Reagent G    500微升

產品說明書      1

 

保存方式

 

保存GENMED標準液(Reagent G)在-20冰箱里,其余的保存在4冰箱里,避免光照;試劑具有揮發(fā)性,注意密閉瓶蓋;GENMED皂化液(Reagent B)和GENMED酸性液(Reagent C)具有腐蝕性,注意操作安全;有效保證6

 

用戶自備

 

1.5毫升離心管:用于樣品處理和標準液配制的容器

15毫升錐形離心管:用于樣品處理的容器

(微型)臺式離心機:用于樣品處理

DOUNCE勻漿器:用于裂解樣品

恒溫水槽或培養(yǎng)箱:用于樣品反應孵育和晾干

高效液相色譜儀(HPLC):用于定量測定

 

實驗步驟

 

  • 樣品準備 

 

1)固態(tài)樣品準備

  • 秤取50待測固態(tài)樣品  
  • 移入一個液氮凍存管
  • 即刻放進液氮罐過夜
  • 次日從液氮罐里取出,即刻(kuai速度)碾碎組織成粉末(注意:切莫使樣品凍融
  • 加入500GENMED處理液(Reagent A
  • 全部轉移到DOUNCE勻漿器
  • 用勻漿棒勻化組織(約80下)
  • 全部轉移到1.5毫升離心管
  • 放進微型臺式離心機離心10分鐘,速度為16000g(或13000RPM,例如eppendorf 5415
  • 小心移取上清液到15毫升錐形離心管
  • 再加入500微升GENMED處理液(Reagent A到含有沉淀顆粒的1.5毫升離心管中
  • 渦旋震蕩1分鐘
  • 放進微型臺式離心機離心10分鐘,速度為16000g(或13000RPM,例如eppendorf 5415
  • 小心移取上清液合并到上述15毫升錐形離心管中(總量1毫升)
  • (選擇步驟)加入1毫升GENMED皂化液(Reagent B
  • (選擇步驟)渦旋震蕩15
  • (選擇步驟)放進70恒溫水槽孵育30分鐘,其間每隔10分鐘渦旋震蕩5秒一次
  • (選擇步驟)置于冰槽里冷卻1分鐘
  • (選擇步驟)加入1毫升GENMED酸性液(Reagent C,混勻
  • 加入4毫升GENMED萃取液(Reagent D
  • 強力渦旋震蕩15
  • 重復實驗步驟21二次
  • 放進臺式離心機離心10分鐘,速度為1300g 
  • 移取上層液相到新的15毫升錐形離心管
  • 放進40干式培養(yǎng)箱晾干
  • 加入500微升30預熱的GENMED溶解液(Reagent E,混勻
  • 即刻進行高效液相色譜分析(注意:如果暫時保存,建議在4不超過48小時;-20不超過3月)

 

2)液態(tài)樣品準備

  • 移取500微升待測液態(tài)樣品1.5毫升離心管
  • 加入500微升GENMED處理液(Reagent A 
  • 渦旋震蕩1分鐘
  • 放進微型臺式離心機離心10分鐘,速度為16000g(或13000RPM,例如eppendorf 5415
  • 小心移取上清液到15毫升錐形離心管中
  • (選擇步驟)加入1毫升GENMED皂化液(Reagent B
  • (選擇步驟)渦旋震蕩15
  • (選擇步驟)放進70恒溫水槽孵育30分鐘,其間每隔10分鐘渦旋震蕩5秒一次
  • (選擇步驟)置于冰槽里冷卻1分鐘
  • (選擇步驟)加入1毫升GENMED酸性液(Reagent C,混勻
  • 加入4毫升GENMED萃取液(Reagent D
  • 強力渦旋震蕩15
  • 重復實驗步驟12二次
  • 放進臺式離心機離心10分鐘,速度為1300g 
  • 移取上層液相到新的15毫升錐形離心管
  • 放進40干式培養(yǎng)箱晾干
  • 加入500微升30預熱的GENMED溶解液(Reagent E,混勻,避光
  • 即刻進行高效液相色譜分析(注意:如果暫時保存,建議在4不超過48小時;-20不超過3月)

 

  • 測定準備

 

  • 開啟儀器預熱15分鐘
  • 根據(jù)下表設置高效液相色譜儀(HPLC)參數(shù)

 

參數(shù)

推薦一

推薦二

推薦三

補充說明

色譜柱

長度:25cm

直徑:4.6mm

長度:15cm

直徑:3.9mm

長度:12.5cm

直徑:4.0mm

Waters儀器或

Agilent儀器

固定相

ODS

ODS

ODS

 

流動相

GENMED流相液(Reagent F

 

流速

1毫升/分鐘

1毫升/分鐘

1毫升/分鐘

 

注射容量

20微升

20微升

20微升

10微升至100微升

檢測

紫外

紫外

紫外

 

波長

294nm

294nm

294nm

290300nm

柱溫

40

40

40

2545

峰值時間(retention

5分鐘

16分鐘

10分鐘

參考

運行時間

10分鐘

20分鐘

15分鐘

參考

 

  • 使用GENMED流相液(Reagent F運行1次(30毫升),以達到色譜柱均衡和溫度穩(wěn)定

 

  • 標準樣品配制

 

  • 準備好51.5毫升離心管,標記為15號管
  • 分別加入100微升GENMED溶解液(Reagent E15號管
  • 移取100微升GENMED標準液(Reagent G1號管,混勻
  • 小心移取100微升1號管稀釋的GENMED標準液(Reagent G2號管,混勻
  • 小心移取100微升2號管稀釋的GENMED標準液(Reagent G3號管,混勻
  • 小心移取100微升3號管稀釋的GENMED標準液(Reagent G4號管,混勻
  • 15號管放進冰槽里備用,避免光照;標準管濃度見下表

管號

GENMED溶解液(Reagent E

GENMED標準液(Reagent G

標準α-生育酚濃度

1

100微升

100微升

20微克/毫升

2

100微升

100微升1號管

10微克/毫升

3

100微升

100微升2號管

5微克/毫升

4

100微升

100微升3號管

2.5微克/毫升

5

100微升

0

0

 

四、色譜分析

 

  • 將上述配制的GENMED標準液(Reagent G和待測樣品放進30培養(yǎng)箱預熱
  • 每次(每個樣品)注射20微升
  • 每次(每個樣品)運行1020分鐘
  • 獲得色譜波峰圖:波峰面積(peak area)或峰值,保存記錄
  • 全部運行完成,使用適量的GENMED流相液(Reagent F清洗色譜柱

 

五、計算含量

 

  • 方法一:通過儀器中的軟件進行測算
  • 方法二:構建標準曲線:縱座標(Y軸)為波峰面積(peak area;橫座標(X軸)為標準α-生育酚濃度(微克/毫升),根據(jù)標準曲線獲得樣品對應α-生育酚濃度(微克/毫升)
  • 方法三:公式計算(選擇單一濃度的標準液)

 

樣本α-生育酚濃度(微克/毫升)=【樣本波峰面積(peak areaX標準α-生育酚濃度】÷對應標準α-生育酚濃度的波峰面積

 

注意事項

 

  • 本產品為20次操作
  • 本產品可以用于β、γδ-生育酚的檢測
  • 本產品檢測范圍是0.350毫克/
  • 操作時,須戴手套
  • 試劑具有揮發(fā)性,注意密閉瓶蓋或使用封口膜
  • 如果樣品中脂類含量高,建議皂化處理
  • GENMED皂化液(Reagent BGENMED酸性液(Reagent C具有腐蝕性,注意操作安全
  • 建議使用GENMED溶解液(Reagent E作為陰性對照或作為基準線
  • 色譜柱的異物殘留、氣泡產生、溫度未達均衡等將導致異常波峰、時間偏移等
  • 用戶可以使用已知濃度的GENMED標準液(Reagent G)或醋酸生育酚作為內參標準加入到樣品中,然后進行萃取,檢測回收率(recovery
  • α-生育酚的HPLC參考圖譜如下

 

 

 

  • α-生育酚的出峰時間(retention)以用戶操作時,使用的GENMED標準液(Reagent G)實際出峰為準
  • 用戶可以使用熒光檢測:激發(fā)波長290nm,散發(fā)波長330nm
  • 本公司提供系列維生素檢測試劑產品

 

質量標準

 

  • 本產品經鑒定性能穩(wěn)定
  • 本產品經鑒定檢測敏感

 

使用承諾

 

秉著信譽至上、客戶滿意、質量承諾的宗旨為我們的用戶提供優(yōu)質產品和服務。用戶收到貨后,應按照產品說明書上的規(guī)定妥善保管并在有效期內使用。我們的產品在銷售前已作嚴格的質量鑒定,保證說明書所述的使用效果。在貨到后10天內若發(fā)現(xiàn)確屬本產品的質量問題,請立即以書面形式(實驗報告)與本公司聯(lián)系,并將該產品退回,經檢驗確系產品質量所致,本公司負責更換產品。如系使用者錯誤操作所致,本公司不承擔由此造成的損失。

 

友情提醒

 

IF IT DOESN’T WORK, RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

 

訂購信息

 

單組份訂購信息

 

編號 名稱 規(guī)格

GMS19071.2.1 GENMED通用型維生素E高效液相色譜法定量檢測試劑盒 20

GMS19071.2.1A GENMED處理液(Reagent A     100毫升

GMS19071.2.1B GENMED皂化液(Reagent B 100毫升

GMS19071.2.1C GENMED酸性液(Reagent C      100毫升

GMS19071.2.1D GENMED萃取液(Reagent D 100毫升

GMS19071.2.1E GENMED溶解液(Reagent E 100毫升

GMS19071.2.1F GENMED流相液(Reagent F 500毫升

GMS19071.2.1G GENMED標準液(Reagent G      10毫升

 

 

 

試劑盒訂購信息 

 

產品編號

名稱

規(guī)格

GMS19071.1

維生素E比色法定量檢測試劑盒

20

GMS19071.2.1

通用型維生素E高效液相色譜法定量檢測試劑盒

20

GMS19071.2.2

血液維生素E高效液相色譜法定量檢測試劑盒

20

GMS19071.2.3

尿液維生素E高效液相色譜法定量檢測試劑盒

20

GMS19071.2.4

奶品維生素E高效液相色譜法定量檢測試劑盒

20

GMS19071.2.5

植物維生素E高效液相色譜法定量檢測試劑盒

20

GMS19071.2.6

藻類維生素E高效液相色譜法定量檢測試劑盒

20

GMS19071.2.7

油類維生素E高效液相色譜法定量檢測試劑盒

20

 

 

 

實驗代做服務:

 

WB代做

HE染色

免疫熒光染色

蛋白相互作用分析

ELISA免費代檢測

免疫組化

熒光定量PCR

番紅O固綠染色

流式細胞檢測

激光共聚焦

透射電鏡服務

DNA甲基化實驗

免疫共沉淀(Co-IP

DNA甲基化

掃描電鏡實驗

microRNA 測序

半定量RT-PCR

分子克隆和質粒載體構建服務

原位雜交(FIsh

石蠟/冰凍切片

RNA結合蛋白免疫沉淀(RIP

CCK8檢測

蛋白雙向(2-D)電泳

蛋白雙向2D-WB

ATP/ADP檢測

Taqman探針

細胞劃痕

基因組DNA提取

 

 

滬公網安備 31011802001678號

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